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Toxin代安徽试剂
产品时间：2024-02-22
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三型副鸡禽杆菌对SPF鸡的致病力试验方法
1．1．2 培养基 半合成培养基、鸡血清鸡肉汤和鸡
血清鸡肉汤琼脂。参照冯文达等［9］的方法制备。
1．1．3 试验用鸡 120只35日龄 SPF 鸡购自北
京实验动物中心在北京所负压隔离器内饲养至57
日龄。
1．2 方法
1．2．1 细菌培养 取冻干卵黄用普通肉汤稀释
后接种鸡血清鸡肉汤琼脂于体积分数为5％ CO2
在37℃培养24h～48h挑取典型菌落接种鸡血清
鸡肉汤在37℃培养10h～12h（B 型）和18 h～
24h（A 型和 C 型）分装保存于－80 ℃冰柜的同
时进行活菌计数和纯粹性检验［10］。
1．2．2 试验分组 将120只试验用鸡随机分成3
组A 型菌组40只鸡B 型菌组35只鸡C 型菌组
45只鸡（表1）。
1．2．3 攻毒 从－80℃取出纯粹性检验合格活菌
计数过的 A、B、C 型菌液按照保存前计数的活菌数
用半合成培养基进行稀释每个剂量注射5只鸡每
只鸡眶下窦内注射0．2mL。所含 cfu／0．2mL 如表
1。攻毒后24h 开始逐只检查每只鸡的发病情况
每天检查1次共检查7d［10］。
1．2．4 细菌分离 在攻毒后96h攻毒剂量最小组
（1．5×104 cfu／0．2mL）各随机取2只鸡进行细菌
分离［6-8］粗提 DNA进行 PCR［911-12］。
2 结果
2．1 细菌培养和活菌计数
B 型副鸡禽杆菌 BJ-05株在鸡血清鸡肉汤培养
基 中培养10h 后菌液浑浊计数结果为10×
108cfu／mL；A 型副鸡禽杆菌 C-Hpg8（CVCC254）在
鸡血清鸡肉汤培养基中培养24h 后可见细菌明显
生长计数结果为0．2×108cfu／mL；668株在鸡血清
鸡肉汤培养基中培养20h 后菌液较浑浊计数结
果为4×108cfu／mL。纯检结果均未发现有其他细
菌生长。
2．2 攻毒鸡只发病情况
攻毒后24h～168h每天逐只检查鸡只的发病
情况。攻毒后24h3大组鸡只大部分发病表现为
眶下窦肿胀流鼻汁、有少数鸡只面部水肿。攻毒后
48h除 A 型3．0×104cfu／0．2mL 组和 B 型100×
104cfu／0．2mL 组各有1只鸡没有发病外其余118
只鸡均发病且大部分鸡只呈现明显的鸡传染性鼻
炎临床症状眶下窦明显肿胀鼻孔周围黏附饲料
面部水肿明显公鸡肉垂水肿。攻毒后72 hA 型
3．0×104cfu／0．2mL 组的5只鸡全部发病其余基
本与攻毒后48h 相同。攻毒后第4天至第5天发
病鸡数和临床症状与攻毒后72h 相同。至第6天
部分发病鸡只临床症状减轻至消失攻毒后第7天
除少数鸡只外大部分鸡只临床症状消失。攻毒后
24h～72h 的详细发病情况见表2。表2中的“＃"
眶下窦肿胀明显面部水肿鼻汁多有的鸡只眼睛
一过性失明公鸡肉垂水肿。“＋＋＋"表示眶下窦
肿胀较明显鼻汁较多；“＋＋"表示眶下窦肿胀有
鼻汁；“＋"表示用手挤压时流出鼻汁。
2．3 细菌分离和 PCR 鉴定
从 A 型、B 型和 C 型各2只鸡的眶下窦均分离
到纯的副鸡禽杆菌将它们接种普通肉汤和普通琼
脂37℃培养96h均未见细菌生长。用6个分离株
的粗提 DNA 进行 PCR结果6／6阳性与标准阳性
对照大小（0．5kb）一致（图1）
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