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T细胞活化

抗原和共刺激信号对幼稚 T 细胞的激活启动了 CD4+ 辅助和 CD8+ 细胞毒性 T 细胞的克隆扩增。除了 T 细胞增殖外，多种信号通路被激活，导致功能性细胞表面标志物的表达和细胞因子的释放。

专注于利用免疫系统靶向癌症的疗法（双特异性、检查点抑制剂抗体和 CAR-T 细胞）市场正在不断增长。监测和量化激活曲线的能力有助于更好地了解 T 细胞如何对某些刺激作出反应，进而可以深入了解药物能够如何利用免疫系统的力量。

分析概念

在单个孔中测量 T 细胞活化、增殖和细胞因子释放的多重方法。

图 1. 人类 T 细胞激活试剂盒检测原理说明。针对 3 种激活标志物的表达分析了不同的 T 细胞表型：CD69（早期）、CD25（晚期）和 HLA-DR（甚至更晚）。2 种效应细胞因子（IFNγ 和 TNFα）也使用 2-plex Qbeads 在同一孔中以夹心免疫测定形式进行量化。可以同时测量 T 细胞增殖或编码的靶细胞，但不包括在此插图中。

主要优势

在生理相关模型中获得对 T 细胞活化状态的更多生物学见解

同时量化表面蛋白和细胞因子的表达

易于使用和解释；预定义的门控策略

最少的样品操作：小体积、一次洗涤、无需稀释、混合和读取

图 2. 激酶抑制剂筛选突出了人类 T 细胞激活曲线的变化。

PBMC 用一组激酶抑制剂 (20 µM) 处理一小时。然后添加 CD3/CD28 Dynabeads 以刺激激活 24 小时。使用 T 细胞激活细胞和细胞因子分析试剂盒和 iQue 系统分析 10 µL 样品。

(A) CD4+CD69+ 门控策略的板视图。绿色框标识仅媒体控件。红框标识环孢菌素对照。黄色框标识图 BD 上显示的化合物（1：鲁索替尼；2：双吲哚基马来酰亚胺 I；3：AZD 7762）。

(B, C) CD4+ 和 CD8+ 细胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表达。

(D)从 PBMC 释放 IFNγ 和 TNFα 细胞因子。

同时量化表面蛋白和细胞因子的表达

图 3. 量化从不同供体分离的 PBMC 的激活曲线和细胞因子释放的变异性。

SKOV-3 细胞与来自 3 个供体的 PBMC（10K/孔）在共培养试验中接种（4K/孔）。激活由 CD3/CD28 Dynabeads 诱导。4 天后按照贴壁细胞提升方案提升细胞，并使用 T 细胞激活细胞和细胞因子分析试剂盒进行分析。(AC)早期 (CD69)、晚期 (CD25) 甚至晚期 (HLA-DR) T 细胞活化标志物的表达。(D)每个供体释放 IFNγ。

最少的样品操作：小体积，一次洗涤，无需稀释

将细胞和上清液作为一个样本的简单协议，可简化工作流程。

无需标记或补偿优化步骤。

对于高级流式细胞术，细胞表型分析和细胞因子检测如何在同一个孔中工作？

iQue ® 人类 T 细胞激活试剂盒使用多重方法同时进行激活的 T 细胞免疫表型分析和细胞因子检测。该试剂盒提供了用于鉴定活化 T 细胞的适当抗体，以及 用于检测和定量分泌的 IFNg 和 TNFa 的iQue Qbeads ® 。将两种组分与活性染料一起添加到每个测定孔中，并与细胞和上清液样品混合物一起孵育。然后预设门控策略将荧光信号从细胞和珠子中分离出来，并自动填充随附的模板，以表达 T 细胞群和细胞因子浓度的数据。

我想在几天内测量 T 细胞活化 (TCA)，我需要在不同的板中设置几个不同的测定吗？这会杀死细胞吗？

iQue ® 人类 T 细胞激活试剂盒允许在一个时间过程中使用单个测定板进行多次测量。使用 T 细胞激活试剂盒进行分析只需要少量 (10 µL) 细胞和上清液样本，这意味着一旦采集了每个样本（在通风柜中无菌），检测板就可以放回培养箱中准备好你的时间过程中的下一个样本。在取样之前，建议轻轻研磨内容物以确保取样均匀，但这不会影响细胞，也不会影响小样本量。  

在 T 细胞激活测定中，对多重 3 种或更多细胞因子检测是否有任何限制？我可以在此测定中测量其他细胞因子和标志物吗？

iQue ® 人类 T 细胞激活试剂盒可与 iQue ® 人类 T 细胞配套试剂盒结合使用，除了已包含在 T 细胞激活试剂盒中的细胞因子外，还可以测量多达 6 种人类细胞因子。Sartorius 还提供一系列细胞因子和趋化因子检测 iQue Qbeads ®  ，以便客户可以制作自己的附加面板，以与 T 细胞激活试剂盒进行多路复用。单个 10 µL 样品可用于分析多达 30 种分泌蛋白，客户可以从 50 多种分析物中选择进行定量。而且，如果您的特定分析物不在我们当前的产品组合中，iQue Qbead ® Devscreen 试剂允许您灵活地连接您自己的捕获抗体或目标蛋白，以获得更加定制的个性化解决方案。

iQue 试剂盒提供了一个集成的解决方案，使高含量，高通量，流式细胞术为基础的分析洞察复杂的生物学。IQueReagent 试剂盒已经开发出来，可以在 iQueAdvanced 流式细胞术平台上运行，并使用 iQueFozet 软件进行分析。

生物洞察力: 多参数数据提供了一个更全面的了解细胞群体更知情的结果。速度: 在5分钟内分析一个96孔板或者在20分钟内分析一个384孔板可以得到更快的结果。易于使用: 简化了工作流程，利用单一平台的测定和数据分析与 iQueFogret 消除了从多个来源获取和关联数据所需的时间。小型化测定体积: 使用少至5μL，保存珍贵的样品和试剂用于额外的分析

IQueQ 珠和 iQueQPanel 试剂盒允许您捕获和分析不同珠型上的特定蛋白质，用于分泌的细胞因子，粘附分子，酶，生长因子受体等的多重定量。 iQueReagent 试剂盒能够测量多功能读数，包括细胞周期，细胞凋亡，膜完整性，增殖和抗体表征，以及珠，细胞或两者上的多种免疫细胞功能，允许您同时评估表型和功能。

抗体发现和开发通过在整个过程中复合抗体结合、功能和效价来提高数据吞吐量和质量。- 抗体筛选-功能分析-细胞系发展过继性细胞疗法更快地评估多种细胞参数，减少细胞和试剂。- 免疫细胞杀伤-免疫细胞评估-细胞因子分析-小分子筛选-在整个药物发现过程中对免疫生物学进行高含量的表型筛选。- 初级免疫细胞筛选-免疫功能-作用机制

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iQue 人和小鼠抗体内化试剂快速分析和比较大组抗体并表征其关键属性(例如抗体内化)的能力可以大大减少候选产生所需的定时器并加速潜在治疗治疗的开发。iQue 人和小鼠抗体内化试剂是免洗 pH 敏感染料，以简单的基于模板的格式从20μL 样品中鉴定抗体内化。小鼠和人类的类型被设计用于包含小鼠或人类 Fc 区域的抗体。该测定方法具有灵活性，可以将其他经过验证的试剂组合起来用于具有高通量能力的多重，无洗涤方案。 iQue 人和小鼠抗体内化试剂盒 iQue 人和小鼠抗体内化试剂盒是高通量，多重，无洗涤测定法，测量抗体内化，抗体特异性和来自单个，30μL 测定体积的细胞健康。抗体很容易用 pH 敏感的抗体内化试剂(R/Red)标记。细胞活力也测量在同一测定使用细胞膜完整性染料(B/绿色) ，以评估一般细胞健康和抗体功能。使用相同的样品，细胞特异性可以通过包含的 iQue 细胞增殖和编码染料 V/Blue (Tag-it VioletTM)来表征。