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CRISPR 产品和服务

CRISPR-Cas9 是一种用于基因组编辑的工具，已从细菌的先天免疫反应中改编而来。细菌捕获并存储来自入侵病毒或 DNA 的 DNA 片段，该区域称为 CRISPR（成簇规则间隔短回文重复序列）阵列。该区域不断转录，产生短的 CRISPR RNA (crRNA) 引导序列，当它们检测到入侵病毒或与其互补的 DNA 时，结合并招募 Cas9（CRISPR 相关蛋白 9）核酸酶，然后特异性切割入侵的DNA。这导致入侵的DNA降解，从而保护细胞。

该 CRISPR-Cas9 系统也经过修改，可用于哺乳动物细胞。通过在哺乳动物细胞中表达 Cas9 核酸酶并引入对我们感兴趣的基因特异的单一引导 RNA 序列 (sgRNA)，我们可以将双链断裂引入细胞的基因组 DNA，以敲除或修改感兴趣的基因。

CRISPR 基因敲除

Cas9（化脓性链球菌CRISPR 相关蛋白 9）是一种核酸内切酶，当被 sgRNA（单向导 RNA）募集到特定 DNA 序列时，会在 DNA 中引入双链断裂。这种双链断裂最常在哺乳动物细胞中通过非同源末端连接 (NHEJ) 进行修复。

NHEJ 通常会导致切割位点的几个碱基对的缺失或插入，当导致移码时，会导致目标基因的功能失活或敲除。为了敲除您感兴趣的基因，BPS Biosciences 提供以下解决方案：

整合 sgRNA 和 Cas9 敲除慢病毒

我们的 Cas9 慢病毒是无法复制的、基于 HIV 的 VSV-G 假型慢病毒颗粒，可随时转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中，包括原代和非分裂细胞。这些颗粒包含一个由 EF1a 启动子驱动的 CRISPR/Cas9 基因，以及由 U6 启动子驱动的 4 个经验证的 sgRNA（单向导 RNA），靶向您感兴趣的基因。

我们的慢病毒到达时可直接转导——不需要其他组件——我们整合 sgRNA 和 Cas9 慢病毒是快速生成敲除细胞系或细胞库的可靠方法；基因敲除效率可高达 90%，具体取决于基因和细胞类型。

非整合 sgRNA 和 Cas9 敲除慢病毒

与我们的整合 sgRNA 和 Cas9 慢病毒不同，我们的非整合慢病毒由突变的整合酶制成，导致 sgRNA 和 Cas9 在您的目标细胞中仅瞬时表达。尽管与我们的整合慢病毒相比，这可能会导致较低的敲除效果（取决于您的基因和细胞类型），但非整合慢病毒消除了慢病毒随机整合到生理相关基因中的风险，并最大限度地减少了任何潜在的关闭如果 Cas9 稳定表达，可能会发生靶向。我们所有的慢病毒都经过验证并可以直接转导。

Cas9 表达细胞池

这些细胞库已经组成型表达 Cas9。要敲除您感兴趣的基因，您只需通过电穿孔或慢病毒转导传递您的基因特异性 sgRNA。这些价格实惠，可以成为设置您自己的敲除实验或筛选的经济高效的平台。

Cas9蛋白

我们的 Cas9 蛋白可用于体外切割分析，以比较和鉴定具有最高切割效率的 sgRNA。

定制淘汰赛服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务，我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的敲除细胞系，针对您感兴趣的任何基因. 开发过程由单独的里程碑组成，其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作，每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR 敲入

当 Cas9 在细胞的基因组 DNA 中产生双链断裂时，哺乳动物细胞会通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 进行修复。当细胞经历 HDR 时，我们可以提供替代模板，ssDNA 寡核苷酸或质粒供体，其中包含我们想要引入的基因突变（突变或标签），两侧是同源臂，细胞将使用它作为模板将这些变化复制并整合到基因组 DNA 中。

定制敲入服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务，我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的敲入细胞系，针对您感兴趣的任何基因. 开发过程由单独的里程碑组成，其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作，每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR激活

CRISPR 协同激活介质 (SAM) 系统用于诱导任何感兴趣基因的转录激活和表达。SAM 系统由 3 个组件组成：(1) 突变的 dCas9（化脓性链球菌CRISPR 相关蛋白 9），缺乏任何核酸内切酶活性，与转录激活因子 VP64 融合；(2) P65（转录因子p65，或核因子NF-κ-B p65）和HSF1（热激因子1）与MS2标签融合；(3) 带有 MS2 标签的 sgRNA，靶向目标基因的启动子区域。

一旦 sgRNA-MS2 靶向感兴趣基因的启动子区域，dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 就会被募集到基因组 DNA 中的位点并开始转录，从而诱导所需基因的表达。诱导可以超过一百倍，这取决于基因。

为了利用 SAM 系统诱导您感兴趣的基因表达，BPS Biosciences 提供以下解决方案：

CRISPR 激活 (CRISPRa) 细胞系

除 sgRNA-MS2 外，这些细胞系稳定表达激活您感兴趣的基因所需的所有成分。这些细胞表达突变的 dCas9（缺乏任何核酸内切酶活性）与 VP64、转录激活因子、P65（转录因子 p65，或核因子 NF-κ-B p65）和 HSF1（热休克因子 1）与 MS2 标签融合.

当这些细胞用 MS2 标记的 sgRNA 转导到您感兴趣的基因的启动子区域时，dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 被募集到基因组 DNA 中的位点并开始转录，诱导您所需基因的表达. 基因特异性 sgRNA-MS2 可以通过慢病毒转导或电穿孔传递。这些细胞系可以成为一个方便且经济高效的平台，用于设置您自己的激活实验或筛选，而无需首先选择表达 dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 的单细胞克隆，从而节省宝贵的时间。

整合 dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 慢病毒

我们的 Cas9 慢病毒是无法复制的、基于 HIV 的 VSV-G 假型慢病毒颗粒，可随时转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中，包括原代细胞和非分裂细胞。这些颗粒包含 dCas9-VP64（具有杀稻瘟素抗性）和 MS2-P65-HSF1（具有潮霉素抗性）基因，可与 sgRNA-MS2 激活慢病毒结合使用，以生成您自己的 CRISPR 激活 (CRISPRa) 细胞系.

整合 sgRNA-MS2 激活慢病毒

这些慢病毒颗粒包含 4 个经过验证的 sgRNA（单向导 RNA），靶向目标基因的启动子区域，与 MS2 融合并由 U6 启动子驱动。这些慢病毒到达时可直接转导到您的 dCas9-VP64 和 P65-HSF1-MS2 表达细胞系中，以稳定激活您感兴趣的基因的表达。

sgRNA-MS2 激活质粒

虽然 Integrating sgRNA-MS2 慢病毒可用于生成稳定诱导感兴趣基因表达的细胞库或细胞系，但 sgRNA-MS2 质粒可以转染或电穿孔到您的细胞中以进行瞬时或稳定（在药物选择后）激活。这还为您提供了无病毒选项，具体取决于您的实验室环境或偏好。

自定义 CRISPR 激活 (CRISPRa) 服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务，我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的 CRISPR 激活细胞系，针对您感兴趣的任何基因。开发过程由单独的里程碑组成，其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作，每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR 屏幕

CRISPR 激酶敲除文库、阵列或池（即将推出！）

BPS Bioscience 正在构建一个针对人类激酶的 CRISPR 敲除文库，可提供阵列和混合格式。我们的整合慢病毒可直接转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中，包括原代细胞和非分裂细胞。除了适当的控制外，每种格式还包括每个基因 4 个 sgRNA。我们的阵列形式随时可用，以每孔一个基因的形式提供，无需任何高通量筛选平台或生物信息学分析。我们的混合形式以高滴度提供，并提供更便宜的替代方案，具体取决于您的筛选能力。

定制服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务，我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术生成 CRISPR 文库，针对您感兴趣的任何感兴趣的基因。开发过程由单独的里程碑组成，其中数据在每个里程碑完成后提供。通过直接与您合作，每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

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