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LR 白色树脂

使用 lr white 作为电子显微镜时，使用 lr white 作为专用电子显微镜的包埋树脂，对环氧树脂包埋体系只需做很少的改动。每个实验室都有自己的嵌入时间表，但是我们在这里列出了一个 lr white 的典型时间表作为其使用的指南。固定: 如果只需要对最后的积木进行电镜分析，则不应改变正常的固定。然而，如果需要良好的超微结构和广泛的 lm 染色，那么我们发现在磷酸盐缓冲液 ph 7.2中加入2.5% w/v 蔗糖是折衷多聚甲醛。单独使用戊二醛和 karnovsky 的戊二醛-甲醛混合物可能会导致 lm 染色不均匀，有些染色不起作用或产生"假阳性"(如 pas) ，而正常的福尔马林固定会产生不可接受的 em 超微结构。对于双重 lm/em 应用，应该避免使用，因为它会对很多 lm 着色产生影响，但是在脱水的第一乙醇，1% 的磷钨酸可以提高电子对比度，而不会对大多数 lm 着色产生不利影响。如果块仅用于专用电子显微镜，则可以使用。脱水: 分级乙醇系列是方法的选择时，包埋’红色白’。丙酮在树脂体系中起着清除自由基的作用，因此固化时组织中留下的丙酮痕迹可以干扰这种聚合。因此，最好避免使用梯度丙酮系列和2,2- 二甲氧基丙烷(产生丙酮)。如果2,2- 二甲氧基丙烷的使用被认为是至关重要的，我们建议在渗透之前用持久的树脂渗透或用干乙醇清洗组织，以尽量减少丙酮污染最终树脂的机会。渗透: 极低的粘度的’lr 白’可以利用允许使用短的渗透时间或大的标本，但不是两者！如果在此期间在60摄氏度进行4-6次“ lr 白"变化，1毫米立方体的动物组织将在大约3小时内被充分浸润。然而，在室温下彻夜浸润，然后两次短暂的树脂变化通常会更方便。由于「 lr white 」的保质期长及提取率低，因此如有需要，样本(例如储存组织)可在4 °c 的树脂中安全存放数星期。大块的确比小块的渗透时间长得多。

聚合: 带有的样品不应用促进剂“冷固化"。这个过程是强烈的放热过程，组织的深色会导致局部热量积聚，从而消除组织内部和周围的局部问题。如果组织没有固定，那么可以使用“ lr white"加速器进行治疗。与光学显微镜的固化块一样，我们建议在聚合过程中冷却模具，但无需将氧气排除在固化块表面之外。在聚合反应发生时，限制氧气与树脂的接触是很重要的。实现胶囊型包埋方便的方法是使用明胶胶囊(可从琼脂科学中获得) ，填充到边缘，然后将胶囊的另一半放在上面。

如果切割方向需要平面包埋，则树脂表面必须用氧气覆盖，一个方便的方法是使用 jb-4型模具和卡盘，用于光学显微镜观察，聚合后卡块可能被锯断并重复使用。聚合时间和温度是最终块体物理特性的基础，比未固化的环氧体系要高得多，我们强烈建议温度为60 °c ± 2，持续20-24小时。有些烘箱不能如此严格地控制聚合温度，如果面对过于脆弱的块，这是第一个参数检查。 lr 白色具有好的渗透力，可以穿透和软化一些低密度聚乙烯胶囊。这会导致它们扭曲和崩溃。这两个问题都可以通过使用明胶胶囊(00号胶囊的尺寸与普通聚乙烯胶囊的尺寸相似)来解决，而且这些胶囊更便宜，在聚合过程中也更容易密封。树脂可以直接从冰箱中取出，与环氧树脂不同，它在单体和聚合状态下的毒性都很低。冷固化促进剂确实有一定的毒性风险，应避免与皮肤和眼睛接触。冷固化促进剂应以每10毫升树脂中一滴的速度使用，这会在10至20分钟内引起聚合。如果聚合速度超过这一点，我们建议更仔细地测量一滴加速剂或更高容量的树脂每滴制造商。修边和切割: 修边可以使用珠宝商、剃须刀或环氧树脂块在超微切割机上使用玻璃刀。切割的方式可以与使用玻璃刀或钻石刀的环氧树脂相同。切片染色: 所有常见的切片染色剂都能在“ lr 白色"树脂包埋的组织上取得良好的效果。在乙醇或甲醇中形成的污渍应该避免，因为这些溶剂会使树脂软化，并且可以去除网格状污渍。作为醋酸铀酰的替代品，1% 的磷钨酸已被证明是一种很好的通用染色剂，无论是作为块状染色剂(如前所述) ，还是作为切片染色剂。在电子显微镜中，初次接触树脂时，电子密度可能会减少，这被认为是因为从刀船或染色液中吸收了水分。这样的稀释没有发生，标本在120kv 电子束下放置了3个小时，没有明显的损坏迹象。

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